狨猴人工辅助生殖技术的建立及部分生物学指标的测定 _医学前沿

摘要：

实验动物特别是基因修饰动物,在生物学研究中具有重要意义。非人灵长类动物与人类进化亲缘关系较近,开发相应的基因工程技术十分必要,人工辅助生殖技术是制备基因工程动物的重要基础。目前针对狨猴的人工辅助生殖技术的研究仍较少,技术缺乏规范性。因此本论文针对我单位饲养的狨猴开展人工辅助生殖技术研究,同时,对狨猴的部分生物学指标进行测定。本论文建立了狨猴人工辅助生殖技术。人工采精技术,采用平行电极,刺激电压1～4V,探究并确定了**直肠探子深度、麻醉剂量及体重范围；性周期测定技术,采用血清学酶联免疫吸附测定方法对狨猴激素水平进行测定,平均性周期为31.75天；超数排卵与人工采卵技术辅助生殖技术,采用氯前列烯醇+重组人卵泡刺激素+人绒毛膜促性腺激素的激素组合方案进行同情发情和超数排卵处理,建立了卵泡穿刺的卵母细胞采集技术,平均采集11..3枚,回收率76.8%；体外授精及胚胎培养冷冻技术,经精卵共培养获得受精卵,并进行胚胎培养和冻存操作,平均受精率87.5%,四细胞发育率85.7%,八细胞发育率14.3%。经过上述技术的研究,形成了 5项技术规范。本论文对狨猴种群的微卫星位点进行了筛选和验证。从41个微卫星标记位点中,通过引物扩增条件的筛选和优化,最终得到20个多态性较好的标记位点,通过30只狨猴群体进行验证,共检测到147个等位基因,平均等位基因数为7.35,有效等位基因数4.04个,群体平均观测杂合度0.15辅助生殖技术,期望杂合度0.25,多态信息含量平均为 0.7053。本文对30只健康狨猴的血常规和血生化指标进行测定。结果显示,雌雄性别组间,高密度脂蛋白、低密度脂蛋白指标测定值差异显著,与野外环境狨猴对比,血红蛋白(HGB)、红细胞平均血红蛋白浓度(MCHC)、中型粒细胞含量(NEUT)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、球蛋白(GLOB)指标测定值差别明显,与猕猴对比,本单位饲养的狨猴血细胞压积(HCT)、丙氨酸氨酸转移酶(ALT)、谷酰胺转肽酶(GGT)、肌酸激酶(CREA)不在对应指标测定范围。综上,本论文建立了狨猴人工辅助生殖技术体系,为狨猴基因修饰研究提供工作基础和技术储备；筛选了可用于狨猴遗传质量检测的微卫星标记位点；测定了健康狨猴的血液学和血生化指标。

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